quote:
Op dinsdag 3 februari 2009 11:44 schreef Muck het volgende:[..]
ja, ze weet echt helemaal niks en heeft ons zelfs al een keer verkeerde informatie gegeven
[..]
oeh, nice

we weten het nog niet

we zijn nu aan het stoeien met vectorNTI
pUC19 -> plasmide dat in E.coli zit
pACYC177 -> plasmide met het anti-kanamycine gen
verder zijn we nog niet echt

Kijk wat herman hier van vind

Ontwerp primers op Km gen met ongeveer 400 daarvoor ( promotor) ... Maak een lange primer... met een overhang aan beide primers die bestaat uit een restictie enzym! (zet een een paar a tjes voor (stuk of 5) omdat het anders moeilijk knippen wordt)... Je moet ze wel goed bestellen!!! (meestal is bestellen 3' - 5' ) maar je kan herman vragen om meer info hierover. Je pcrt het gen eruit... opzuiveren... ( ook even op gel checken enzo) Digestie uitvoeren zodat je sticky ends krijgt. Kijk wat voor een restrictie sites Puc19 heeft....zorg ervoor dat je 1 of 2 restrictie enzymen neemt die de school in huis heeft en maar 1 keer knippen... anders knip je je plasmide aan gort

Neem je er 1, dan moet je na restrictie van het plasmide de plasmide behandelen met CIP omdat het anders aanzichzelf terug ligeert... dat wil je niet... Kies je voor 2 restrictie enzymen.... Heb je dat probleem niet, maar dan wil je wel dat het uniek knipplaatsen zijn....
Succes

ik hoop dat je het begrijpt...

anders kan herman je misschien wel meer uitleggen...
Op donderdag 4 juni 2009 15:52 schreef Disorder het volgende:Mannen van Nederland: Neuk niet met Californium.